石磊 发表于 2013-5-8 16:26:35

水不溶的样品如何能做好反相C18纯化?

正在做一个项目,样品(暂叫做A吧)在水中几乎一点不溶解,但是据一些渠道了解到,这个在纯化工艺中是有RPHPLC这一步的。等度C18分析柱上主峰保留时间约20min,杂质保留时间约23min。1. 现在已知A在纯甲醇中溶解度能到400mg/ml,在50%甲醇中溶解度仅为4mg/ml;2. A样在纯DMSO溶解度约为200mg/ml,在50%DMSO中溶解度能到100mg/ml,在25%DMSO中溶解度能到50mg/ml;3. 在做C18柱纯化时,用20%乙腈-buffer平衡,37%乙腈-buffer等度洗脱约10个柱体积时主峰开始出峰。上样时已经尝试了样品用纯DMSO溶解、25%DMSO-水溶解,上样体积均为0.5ml(柱体积40ml),结果均感觉峰展宽严重,主峰后的杂质分不掉。针对上述情况,大家有什么好的建议吗?碰到这种水不溶样品做反相纯化时该怎么解决的呢?
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