感受态如何制备？质粒如何转化？

最近做感受态与质粒转化的实验总是长不出菌来。所用的菌是DH-5α，先按步骤制出感受态，接着在4℃冰箱中放12-14小时，再进行质粒转化。所用的标准质粒是6p-1，转化后的菌液是涂布在含有氨苄的平板上，并且设置了阴性对照与阳性对照，但是无论是实验组还是对照组都长不出菌来。所用的CaCl2也是重新配过的。请问这个问题是出在哪？